Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1DF糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到肝细胞自身免疫球蛋白到用到1HG肝炎临床研究症状的困难重重率在孩童时期就有很好的阐述，多个肝细胞自身免疫球蛋白无症状的孩童中都有70%在毒素转换成后10年内患上肝炎，而随访15年的孩童这一比重上升到84%。相比之下之下，占临床研究1HG肝炎一半以上的HG1HG肝炎的肺癌机制还没有人得到充分的研究。

愈发多的人开始用于分期系统来定义1HG肝炎的困难重重：个体在用到多种肝细胞自身免疫球蛋白时重回第1前期，用到血糖异常时重回第2前期，用到症状时重回第3前期。一些多发肝细胞自身免疫球蛋白无症状的个体，在1期和2期，困难重重较迟，并发展为肺癌的1HG肝炎。我们之前阐述了一组成员在首次样品到多种肝细胞自身免疫球蛋白比对后将近10年无肝炎的极迟困难重重者，这组成员高血压人数少，但特征非常明确。随后，我们找到肝细胞自身抗原特异性CD8+T细胞核中间体在困难重重加速的高血压中都前提不长期存在，但在近期肺癌和长期长期存在的肝炎高血压中都很容易样品到。这可能说明，与困难重重高血压相比之下，这些高血压自身免疫中间体的可调增强。

早期研究说明，尽管可调性T细胞核(Treg)用于量正常，但肝炎高血压长期存在一些动态有缺陷，其中都都有对IL-2的中间体能力也增加。此外，肝炎高血压中都的现象CD4+T细胞核可能对可调更具抵抗性，平庸为现象T细胞核的抑制作用西移动，自然产生的Treg和体外产生的诱发Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞核中都IL-2中间体西移动。本研究的目的是阐述了CD4+可调性T细胞核(Treg)在一小群极加速困难重重者中都的特征，他们的成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究是一项以一些人为基础的纵向研究，在21岁不限肺癌的高血压亲属中都检查1HG肝炎的危险因素。我们之前阐述了长期加速困难重重者的特征，他们保持多重肝细胞自身免疫球蛋白无症状超过10年，但没有人用到肝炎的临床研究症状，迟性或非神经性自身免疫。随后，10名独自保持无肝炎并乐意透过大量肠道比对的加速困难重重者扩及T和B细胞核动态分析。在目前的研究中都，8名迟困难重重者(SP组成员)，中都位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身免疫球蛋白无症状。所有的行动者都处于1HG肝炎困难重重的1期，尽管一些人随后得不到了肝细胞自身免疫球蛋白对某些抗原的无症状中间体，然而，一名高血压从未处于2期将近6年，但没有人用到临床研究症状，一名高血压被诊疗为肝炎，该受试者72岁，在采集实验比对时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中都对该NADP展开了单独评估。受控外周血单个核细胞核(PBMCs)，运用于多匹配流式细胞核奥义和T细胞核抑制作用试验评估NADP中都Treg的频谱、表HG和动态。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、也就是说和回归)展开无监督聚类分析，评估Treg表HG。

结果：与卫生NADP相比之下，来自迟困难重重体的清醒CD4+T细胞核的监督聚类推测，作用于的清醒CD4+ Treg频谱上升，与糖皮质激素诱发的TNFR相关蛋白(GITR)强调上升有关。一名HbA1c下降的高血压与困难重重加速者和转换的对照组成员相比之下，Treg谱有所有所不同。动态分析说明，与卫生NADP相比之下，来自加速困难重重体的Treg作用于的CD4+现象T细胞核抑制作用明显受损。平庸为对现象CD4+T细胞核CD25和CD134强调的抑制作用上升。

由此可知1 透彻的表HG分析推测，CD4+Treg亚HG在迟困难重重队列中都上升。由FlowSOM转化的Treg寝室，聚集地在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标上物强调鉴定出有10个元簇:清醒T细胞核_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞核;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用于9个有所不同Treg标上转化的10个元簇的MST。每个终端都有一个集群(100个集群)，非常大的元集群(10个元集群)在终端组成员四周装裱。每个终端中都的饼由此可知暗示单个标上的强调级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以推测整体标上强调。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)转化由此可知，以及FlowSOM识别的每个元簇的裂口。(e-l)相对于轻元素为每个metacluster筒新线由此可知(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞核(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞核(l)。黄色红色都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用于CITRUS的预测模HG猜测，Treg频谱的上升是困难重重加速的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比起SP行动者和转换的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞核上的相似之处。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的都有性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调展开受控，模拟器FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)组成员以及NADPSP 606(黄色)中都CD25+ cd127的频谱汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的筒新线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，对角突出有的簇被识别为SP和HD队列之间的有所不同。(j)筒新线由此可知推测了在SP(虎纹)和HD(灰点)组成员中都，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对于轻元素(比重)。(k)直方由此可知推测每个簇的表HG(白色)和Treg标上相对于强调与背景强调(粉红色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇中都标上的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验

由此可知3 与卫生献血者相比之下，困难重重加速者清醒treg的GITR上升。每个清醒CD4+T细胞核元簇(清醒T细胞核_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞核;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个强调标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的强调热由此可知(sp606不都有在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR强调串联，推测直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon配对字母秩和检验，p< 0.07(黄色)所有NADP都有，p< 0.05(粉红色)NADPSP 606和转换的HD不都有在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR强调，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(黄色)串联，推测直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对字母秩检验

由此可知4 来自加速困难重重的CD4+ treg细胞核控制现象CD4+T细胞核的能力也增加。SP组成员用粉红色的新线和红色暗示，HD组成员用黑色的新线和红色暗示，黄色的新线/红色暗示NADPsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标上为CFSE, Treg按通过观察的比重高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再生细胞核，养成3当晚展开流式细胞核奥义样品。(a-d)与CD4+反之亦然者相对于应的treg养成(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者养成。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用%-。用于无症状对照(作用于的响应细胞核内含treg)计数抑制作用%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

由此可知5 现象CD4+T细胞核对加速困难重重的T细胞核再生的抑制作用更敏感。SP组成员用粉红色的新线和红色暗示，HD组成员用黑色的新线和红色暗示，黄色的新线/红色暗示NADPsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标上，treg按通过观察的比重高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再生细胞核，养成3当晚展开流式细胞核奥义(CD25反染)和细胞核因叔父分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同养成。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用%-(b)。(c,d) CD25抑制作用%-(c)和CD134抑制作用%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中都的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

结论：我们得出有的结论是，来自加速困难重重叔父的再生清醒CD4+Treg在GITR强调中都得到了延展和丰富多彩，强调了再进一步研究Treg在1HG肝炎风险个体中都的表型的必要性。

原文出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28