Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型高血压患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现人体内自身抗形体到显现1同型乳癌外科征状的困难重重率在成年人时期就有较好的描述，多个人体内自身抗形体乙型肝炎的成年人中的有70%在肝脏反转后10将近患上乳癌，而随访15年的成年人这一比重增高到84%。相较之下，占外科1同型乳癌一半以上的同型1同型乳癌的发病有助于还无法获得充分的深入研究。

越来越多的人开始运用于分期种系统来下定义1同型乳癌的困难重重：个形体在显现多种人体内自身抗形体时转入第1过渡阶段，显现血糖异常时转入第2过渡阶段，显现征状时转入第3过渡阶段。一些多发人体内自身抗形体乙型肝炎的个形体，在1期和2期，困难重重较很慢，并发展为发病的1同型乳癌。我们先前描述了一分组在首次侦测到多种人体内自身抗形体结果显示后至少10年无乳癌的极很慢困难重重者，这分组高血压伤亡人数少，但特征非常说明。随后，我们发现人体内自身抗形体选择性CD8+T蛋白质化学反应在困难重重缓很慢的高血压中的必需不依赖于，但在现阶段发病和长年依赖于的乳癌高血压中的很容易侦测到。这似乎断定，与困难重重高血压相较，这些高血压自身免疫的调节进一步提高。

早期深入研究断定，尽管调节性T蛋白质(Treg)数量正常，但乳癌高血压依赖于一些种系统缺陷，其中的除此以外对IL-2的化学反应灵活性减低。此外，乳癌高血压中的的effectCD4+T蛋白质似乎对调节增添抵抗性，表现为effectT蛋白质的诱发减弱，其本质显现出的Treg和形体外显现出的作用于Treg，以及抗形体境遇的CD4+T蛋白质中的IL-2化学反应减弱。本深入研究的目的是描述了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在海岸边极缓很慢困难重重者中的的特征，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX深入研究是一项以群形体为基础的纵向深入研究，在21岁请注意确诊的高血压亲属中的检查1同型乳癌的致命考量。我们先前描述了长年缓很慢困难重重者的特征，他们保持稳定多重人体内自身抗形体乙型肝炎超过10年，但无法显现乳癌的外科征状，很慢性或非开展性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无乳癌并愿意提供大量血液结果显示的缓很慢困难重重者设为T和B蛋白质种系统分析方法。在目前的深入研究中的，8名很慢困难重重者(SP分组)，中的位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的人体内自身抗形体乙型肝炎。所有的行动者都受制于1同型乳癌困难重重的1期，尽管一些人随后失掉了人体内自身抗形体对某些抗形体的施打，然而，一名高血压早已受制于2期至少6年，但无法显现外科征状，一名高血压被诊断为乳癌，该患者72岁，在通过观察实验结果显示时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在深入研究小分组中的对该NADPH开展了单独评氘。分离外周血单个氘蛋白质(PBMCs)，选用多值流式蛋白质绝技和T蛋白质诱发试验评氘NADPH中的Treg的增益、性状和种系统。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接)开展无监督聚类分析方法，评氘Treg性状。

结果：与健康NADPH相较，来自很慢困难重重形体的思绪CD4+T蛋白质的监督聚类表明，介导的思绪CD4+ Treg增益增高，与糖皮质激素作用于的TNFR相关蛋白(GITR)理解增高有关。一名HbA1c急剧下降的高血压与困难重重缓很慢者和归一化的解读分组相较，Treg谱有所并不相同。种系统分析方法断定，与健康NADPH相较，来自缓很慢困难重重形体的Treg介导的CD4+effectT蛋白质诱发明显受损。表现为对effectCD4+T蛋白质CD25和CD134理解的诱发增高。

由此可知1 深入的性状结果表明，CD4+Treg亚同型在很慢困难重重链表中的增高。由FlowSOM转换成的Treg室，群聚在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标上物理解鉴定成10个元簇:思绪T蛋白质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T蛋白质;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白质;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)运用于9个并不相同Treg标上转换成的10个元簇的MST。每个路由表代表一个坦克部队(100个坦克部队)，大得多的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由表分组周围绘图。每个路由表中的的点心由此可知回应单个标上的理解级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以表明整形体标上理解。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转换成由此可知，以及FlowSOM标识的每个元簇的较厚。(e-l)相较重元素为每个metacluster装入中央线由此可知(重元素> 0.05%)断定为HD和SP分组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T蛋白质(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T蛋白质(l)。红色边框代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 运用于CITRUS的预测模同型证实，Treg增益的增高是困难重重缓很慢的标志。基准介导(a - f)和果树分析方法(g-k)比较SP行动者和归一化的HD行动者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的代表性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解开展分离，建模FlowSOM群形体。(b) HD(白点)和SP(蓝点)分组以及NADPHSP 606(红色)中的CD25+ cd127的增益汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导子集的装入中央线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度可视，箭头突成的簇被标识为SP和HD链表间的并不相同。(j)装入中央线由此可知表明了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中的，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相较重元素(比重)。(k)直方由此可知表明每个簇的性状(粉红色)和Treg标上相较理解与背景理解(白色);上列，存储器Treg_3;示意图一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇中的标上的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩检验

由此可知3 与健康献血者相较，困难重重缓很慢者思绪treg的GITR增高。每个思绪CD4+T蛋白质元簇(思绪T蛋白质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T蛋白质;HLA-DR + GITR +思绪T蛋白质;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个理解标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的理解热由此可知(sp606不除此以外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR理解串联，表明直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon配对大写字母秩和检验，p< 0.07(红色)所有NADPH除此以外，p< 0.05(白色)NADPHSP 606和归一化的HD不除此以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR理解，从基准介导，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(红色)串联，表明直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写字母秩检验

由此可知4 来自缓很慢困难重重的CD4+ treg蛋白质控制effectCD4+T蛋白质的灵活性减低。SP分组用白色的中央线和边框回应，HD分组用粉红色的中央线和边框回应，红色的中央线/边框回应NADPHsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质开展分选。CD4+CD25−(此番者)被标上为CFSE, Treg按掩蔽的比重氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠作用于蛋白质，指导3同月开展流式蛋白质绝技侦测。(a-d)与CD4+此番者相较应的treg指导(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者指导。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE诱发总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发总和。运用于乙型肝炎解读(介导的响应蛋白质不含treg)计算出来诱发总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 effectCD4+T蛋白质对缓很慢困难重重的T蛋白质作用于的诱发更敏感。SP分组用白色的中央线和边框回应，HD分组用粉红色的中央线和边框回应，红色的中央线/边框回应NADPHsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质开展分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标上，treg按掩蔽的比重氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠作用于蛋白质，指导3同月开展流式蛋白质绝技(CD25反染)和蛋白质因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606此番者都由指导。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE诱发总和(b)。(c,d) CD25诱发总和(c)和CD134诱发总和(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中的的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得成结论的结论是，来自缓很慢困难重重子的作用于思绪CD4+Treg在GITR理解中的获得了扩展和比较丰富，强调了进一步深入研究Treg在1同型乳癌后果个形体中的的举例来说的合理性。

译文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28